As bactérias lácticas (BAL) são economicamente importantes devido à sua aptidão fermentativa e também conferem benefícios nutricionais e à saúde. Pediococcus acidilactici NCDC 252 (NCDC 252) é um potencial probiótico com novo genoma que exibiu todos os atributos probióticos in vitro, colonização no intestino e sobrevivência em condições que imitam fluido gástrico, intestinal e vaginal. O genoma foi avaliado quanto à sua capacidade de produzir peptídeo antimicrobiano (AMP). O AMP do NCDC 252 foi isolado e purificado contra cepa indicadora (Escherichia coli). A produção de AMP foi otimizada em caldo MRS a 32 °C, pH6 e até 36 h de incubação em condições aeróbicas e anaeróbicas. O AMP foi purificado 2,2 vezes com rendimento de 7,2% e atividade específica de 64,5 U mg/mL usando precipitação com sulfato de amônio (até 70%) e cromatografia de filtração em gel. O peso molecular do AMP purificado foi calculado em 2,5 KDa. Estudos de tricina SDS-PAGE e LC/MS confirmaram que é um peptídeo de baixo peso molecular. O AMP foi estável na faixa de pH de 3 a 9 e na faixa de temperatura de 40 °C a 100 °C. O tratamento enzimático inativou o AMP, enquanto o tratamento com detergente aumentou sua atividade.